3D培养牙周膜干细胞生物学特性的初步研究

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3D培养牙周膜干细胞生物学特性的初步研究

罗傲翔;吴补领;侯晋;吴靖漪;胡娇;李心竹

【期刊名称】《牙体牙髓牙周病学杂志》 【年(卷),期】2014(24)5

【摘 要】AIM:To study the biology of periodontal ligament stem cells (PDLSCs)in 3D hanging drop culture. METHODS:PDLSCs were cultured by adherent (2D)culture and 3D hanging drop method(3D culture)at the densi-ty of 2.5 ×104 ,5 ×104 and 1 ×105 respectively.The

morphology,viability and surface antigens of the cells were ex-amined by optical microscope,Live /Dead assay and flow cytometriy respectively.The mRNA expression of ALP and OPN was detected by qRT-PCR.Mineralized nodule was observed by alizarin red staining.RESULTS:3D cultured PDLSCs can form dense 3D spheroid.No central necrosis was found in the 3D spheroid culture by the cell density of 2.5 ×104 ,while necrosis was found in that by 5 ×104 and 1 ×105 .Surface markers of stem cells were expressed on PDLSCs without significant difference between 2D and 3D cultures.More mineralized materials,higher expression of ALP and OPN mRNA were found in 3D spheroid cultured cells (P<0.05).CONCLUSION:3D cultured can keep the stem cell biological characteristics of PDLSCs.%目的：研究悬滴法3D培养和2D贴壁培养的牙周膜干细胞（PDLSCs）生物学特性的差异。方法：改良酶消化组织块法分离培养PDLSCs，分别行2D贴壁培养及3D培养（3D培养按不同细胞接种数分为2．5×104，5×104及1×1053组），培养


96 h后分别用Live／Dead染色法分析细胞活性；流式细胞术检测干细胞表面标记物；然后对2D、3D培养的PDLSCs进行矿化诱导，茜素红染色及荧光定量PCR检测矿化结节形成情况以及矿化相关基因ALP和OPN mRNA的表达水平。结果：3D培养的PDLSCs可形成致密的细胞聚合物，2．5×104组PDLSCs细胞聚合物中心未见坏死现象，5×104组和1×105组则有较为明显坏死现象；3D和2D培养的PDLSCs间充质干细胞表面标记物的阳性表达率均无显著差异（P＞0．05）；茜素红染色和荧光实时定量PCR结果显示，3D培养的PDLSCs形成矿化结节的数量及其矿化相关基因ALP OPN mRNA的表达水平均显著高于2D培养的细胞（P＜0．05）。结论：3D悬滴培养法是一种理想的PDLSCs培养方法。 【总页数】6页(P264-268,299)

【作 者】罗傲翔;吴补领;侯晋;吴靖漪;胡娇;李心竹

【作者单位】广东 广州 南方医科大学南方医院，510515; 广东 广州 南方医科大学口腔医学院，510515;广东 广州 南方医科大学南方医院，510515; 广东 广州 南方医科大学口腔医学院，510515;广东 广州 南方医科大学南方医院，510515; 广东 广州 南方医科大学口腔医学院，510515;广东 广州 南方医科大学附属广东省口腔医院，510280;广东 广州 南方医科大学南方医院，510515; 广东 广州 南方医科大学口腔医学院，510515;广东 广州 南方医科大学南方医院，510515; 广东 广州 南方医科大学口腔医学院，510515 【正文语种】中 文 【中图分类】R780.2 【相关文献】


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