唾液淀粉酶的最适PH的测定 2

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唾液淀粉酶最适ph值的实验测定 实验目的：掌握测量PH对酶活性的方法，测定唾液淀粉酶的最适PH

实验原理：ph的改变对酶的催化影响很大，酶催化活性最高时，反应体系的PH值称为最适PH值。本实验

用唾液淀粉酶为材料来观察酶活性受ph影响的情况。淀粉被分解越多，剩余底物越少，A值最小，过酸或过碱会抑制酶的活性，使底物分解减少，A值增大。碘液与淀粉的不同程度水解的产物反应呈不同颜色，即：淀粉（蓝色）、紫色糊精（紫色）、红色糊精（红色）、麦芽糖及葡萄糖（黄色）。[1]利用朗伯—比尔定律，用分光光度计测量出各溶液在660nm处地吸光度A，从而间接测出唾液淀粉酶的最适PH值。A在ph值6.0~8.0内范围变化，并且随着ph的增大而先减少后增大，ph=6.2（6.8）左右，吸光值最低，所以唾液淀粉酶最适ph值约为6.2（6.8）。

实验仪器与试剂：

试管、试管架、洗耳球、小烧杯、坐标纸、37℃恒温水箱、v-1110D可见分光光度计、吸量管（1ml 5ml 10ml） 试剂药品：碘液、0.2mol/L磷酸二氢钠溶液、0.2mol/L磷酸氢二钠溶液、蒸馏水、2.5g/L淀粉溶液

实验步骤：

（1）配置缓冲液 ：

配置各个PH的缓冲液10ml， 选择ph值从6.0到8.0，间隔0.2.不同ph值的测（总共10ml）

用量（ml）

———————————————————————————————————————————— 试剂 6.0 6.2 6.4 6.6 6.8 7.0 7.2 7.4 7.6 7.8 8.0 ———————————————————————————————————————————— 磷酸氢二钠 0.615 0.925 1.325 1.875 2.45 3.05 3.6 4.05 4.35 4.575 4.735 磷酸二氢钠 4.385 4.075 3.675 3.125 2.55 1.95 1.4 0.95 0.65 0.425 0.265 H2O 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 ———————————————————————————————————————————— （2）唾液的获取：

.喝一大口凉白开（或蒸馏水），不要咽下去，做咀嚼运动2分钟，然后 吐入烧杯中，即可。



（预实验）唾液的稀释、淀粉用量的确定






（3）淀粉用量的确定：

管号 1 2 3 空白

7.0PH缓冲液 0.9 0.9 0.9 0.9 2.5g/L淀粉 0.4 0.5 0.6 -

唾液（稀释10倍） 0.1 0.1 0.1 0.1 混匀，37 ℃水浴7.5min，然后向每管加2滴碘液

H2O 5.6 5.5 5.4 6.0 混匀，观察现象，并选择适中一支，记录其中用量 结果：（ 0.4ml） 2.5g/L淀粉为最适量（颜色最浅）

（4)酶液稀释倍数的确定：

稀释倍数 5 10 15 20 25 30 酶液（ml） 1 0.5 0.4 0.25 0.2 0.2 H2O(ml) 4 4.5 4.6 4.75 4.8 5.8 另取试管各取配好的稀释液0.1ml：

管号 1 2 3 4 5 6 7 稀释倍数 5 10 15 20 25 30 空白 7.0PH缓冲液/ml 0.9 0.9 0.9 0.9 0.9 0.9 0.9 2.5g/L淀粉/ml 由第3步操作确定

唾液/ml 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 混匀，37 ℃水浴7.5min，然后向每管加2滴碘液

H2O(ml) 6 6 6 6 6 6 6

混匀，观察现象，并选择适中一支，记录稀释倍数

颜色

结果：观察到酶稀释颜色最浅，即酶稀释倍数最适合（10倍最适）

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