粟酒裂殖酵母N-糖酰胺酶在大肠杆菌中的表达、纯化及活性分析

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粟酒裂殖酵母N-糖酰胺酶在大肠杆菌中的表达、纯化及活性

分析

信丰学;王鹏;钟盛华;祁庆生

【期刊名称】《生物工程学报》 【年(卷),期】2008(24)4

【摘 要】根据GenBank中公布的粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)N-糖酰胺酶(Png1p)cDNA序列,设计并合成一对特异性引物,利用RT-PCR技术从粟酒裂殖酵母中克隆出糖酰胺酶cDNA.将得到的基因克隆到表达载体pET-15b中.重组质粒转入大肠杆菌BL21(DE3)中,经诱导表达和纯化提取后,进行酶活测定.实验结果表明,该酶的分子量约为39 kD,纯化后的重组N-糖酰胺酶可以对变性处理的糖蛋白进行糖链的切除,且这种作用需要还原剂DTT的辅助作用;N-糖酰胺酶只对错误折叠的糖蛋白有作用,对天然的糖蛋白没有作用.等量粟酒裂殖酵母Png1p在不同温度、pH,DTT浓度和底物变性温度下对等量核糖核酸酶B(RNase B)的脱糖基化检测发现,重组酶的最适反应温度30℃,最适反应pH为7.0,需要的最适DTT浓度为10 mmol/L,底物在100℃处理10 min时酶的脱糖基化率最高.

【总页数】6页(P592-597)

【作 者】信丰学;王鹏;钟盛华;祁庆生

【作者单位】山东大学微生物技术国家重点实验室,济南,250100;江西农业大学理学院,南昌,330045;山东大学微生物技术国家重点实验室,济南,250100;江西农业大学理学院,南昌,330045;山东大学微生物技术国家重点实验室,济南,250100


【正文语种】中 文 【中图分类】Q78 【相关文献】

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